——沃特世18種鄰苯二甲酸鹽UPLC/MS/MS分析解決方案
 

　　近日，中國(guó)臺(tái)灣媒體報(bào)道了起云劑遭受增塑劑污染的事件，導(dǎo)致食品安全檢測(cè)市場(chǎng)頓時(shí)風(fēng)起“云”涌，鄰苯二甲酸鹽的檢測(cè)再度成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。

　　起云劑（又名渾濁劑、乳濁劑、增濁劑）也就是我們常說的乳化穩(wěn)定劑。主要應(yīng)用于飲料和奶類制品。在飲料中使用，有助于釋放與保留果汁飲料的香氣，包埋果汁飲料的異味、雜味，也能增強(qiáng)果汁飲料口感的潤(rùn)滑性、厚實(shí)感，尤其是有效改良果汁飲料的天然感觀，顯著提高果汁飲料的品質(zhì)質(zhì)量。起云劑的主要成分為風(fēng)味油、單體香油、增重劑、乳化穩(wěn)定劑、乳化劑、水，它本身對(duì)人體并沒有危害，本次事件的發(fā)生是由于少數(shù)起云劑生產(chǎn)廠家為降低成本使用在食品中禁用的增塑劑類物質(zhì)鄰苯二甲酸鹽代替原本應(yīng)該使用的棕櫚油，從而引發(fā)了食品安全事件。

　　確保食品添加劑或者食品本身是否含有鄰苯二甲酸鹽類物質(zhì)的一個(gè)途徑就是使用分析手段對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)。

　　我們常說的鄰苯二甲酸鹽是一類結(jié)構(gòu)比較相似的化合物，在2011年6月，中國(guó)衛(wèi)生部將17種鄰苯二甲酸鹽類物質(zhì)列入《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑名單（第六批）》名單，如下：

　　鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）、

　　鄰苯二甲酸二異壬酯（DINP）、

　　鄰苯二甲酸二苯酯（DPP）、

　　鄰苯二甲酸二甲酯（DMP）、

　　鄰苯二甲酸二乙酯（DEP）、

　　鄰苯二甲酸二丁酯（DBP）、

　　鄰苯二甲酸二戊酯（DPP）、

　　鄰苯二甲酸二己酯（DHXP）、

　　鄰苯二甲酸二壬酯（DNP）、

　　鄰苯二甲酸二異丁酯（DIBP）、

　　鄰苯二甲酸二環(huán)己酯（DCHP）、

　　鄰苯二甲酸二正辛酯（DNOP）、

　　鄰苯二甲酸丁基芐基酯（BBP）、

　　鄰苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯（DMEP）、

　　鄰苯二甲酸二（2-乙氧基）乙酯（DEEP）、

　　鄰苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯（DBEP）、

　　鄰苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯（BMPP）

　　本方法介紹了兩種基于沃特世超液相色譜技術(shù)（UPLC技術(shù)）分析18種（含中國(guó)臺(tái)灣FDA要求）鄰苯二甲酸鹽的方法，方法一為采用沃特世超液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（UPLC/MS/MS），該方法具有分析速度快，靈敏度高的特點(diǎn)。適用于實(shí)驗(yàn)室擁有質(zhì)譜系統(tǒng)并追求檢測(cè)靈敏度的用戶。方法二為采用沃特世超液相色譜系統(tǒng)和二極管陣列檢測(cè)器（UPLC/PDA）分析方法，適用于暫時(shí)還不具有質(zhì)譜系統(tǒng)的用戶。

　　樣品提取（中國(guó)臺(tái)灣FDA方法）：

　　取混勻后樣品1g，稱量，置于50ml容量瓶，加入約45ml 甲醇，超聲波震蕩30min, 冷卻后用MeOH 定容到50ml。靜置后，取上部溶液約5ml置于離心管中，于 3500rpm離心10min,取上清液裝瓶,待測(cè)。對(duì)于基質(zhì)比較復(fù)雜的樣品，對(duì)于提取后的樣品可以采用進(jìn)一步的固相萃取凈化手段。

 

【方法一：UPLC/MS/MS方法】

實(shí)驗(yàn)條件

A．UPLC 條件
LC系統(tǒng)：     ACQUITY UPLC H Class系統(tǒng)
色譜柱：   ACQUITY UPLC HSS C18，1.7um，2.1X100mm，
流動(dòng)相A：0.1%FA水溶液
流動(dòng)相B：乙腈
流速：0.4ml/min
梯度洗脫:   梯度表

 

進(jìn)樣體積：10uL
柱溫：35℃,   
樣品溫度：    10℃
強(qiáng)洗溶劑：    ACN 
弱洗溶劑：    H2O :ACN= 95:5
運(yùn)行時(shí)間：    7.5分鐘

B. MS條件:
系統(tǒng)：          ACQUITY UPLC TQD
離子化模式：ESI+
電離電壓：   3.2KV
離子源溫度：120℃
脫溶劑氣溫度：  400℃
脫溶劑氣流量:   650L/Hr

 

 

18種鄰苯二甲酸鹽分析結(jié)果（濃度：10ppb）
（DMP、DMEP、DEEP、DEP、DPhP、DEHP、BBP、DIBP、DBP、DBEP、DPP、DCHP、BMPP、DHXP、DNOP、DINP、DNP、DIDP）


部分MRM 通道:


【方法二：UPLC/PDA方法】

A．UPLC/PDA 條件
儀器系統(tǒng)：Waters UPLC H-Class/PDA 
色譜柱：ACQUITY UPLC HSS C18 （1.7um, 2.1×100mm）
波 長(zhǎng)：225nm，
柱 溫：45℃，

流 速：0.4mL/min
流動(dòng)相：A-水，B-乙腈，進(jìn)行梯度洗脫

18種鄰苯二甲酸鹽色譜分析結(jié)果如下圖所示
 

飲料基質(zhì)1加標(biāo)與空白結(jié)果



飲料基質(zhì)2加標(biāo)與空白結(jié)果



關(guān)于Waters ACQUITY UPLC H-Class
HPLC的操作方法，UPLC的性能
如果您正在進(jìn)行常規(guī)分析，或方法開發(fā)，或僅僅是喜歡四元泵系統(tǒng)多溶劑的靈活使用，而又渴望獲得UPLC技術(shù)帶來的快速、高靈敏度、高分離度的性能，那么沃特世公司ACQUITY UPLC H-Class系統(tǒng)是您目前*的選擇。ACQUITY UPLC H-Class系統(tǒng)是一套經(jīng)過優(yōu)化的*系統(tǒng)，具有四元溶劑混合的靈活性和簡(jiǎn)易性，并帶有一個(gè)流通式進(jìn)樣器，可實(shí)現(xiàn)UPLC分離的*性能——高分離度、靈敏度和高通量，同時(shí)還保持了ACQUITY系統(tǒng)所被*的耐用性和可靠性。
選擇ACQUITY UPLC H-Class，您可以在面向未來的LC平臺(tái)上繼續(xù)運(yùn)行現(xiàn)有的HPLC方法，并可實(shí)現(xiàn)向UPLC分離的無縫轉(zhuǎn)換。當(dāng)您一切準(zhǔn)備就緒后，即可使用集成系統(tǒng)工具和可靠的色譜柱工具包進(jìn)行方法轉(zhuǎn)換和方法開發(fā)，以簡(jiǎn)化過渡流程。
特色：
多溶劑混合：QSM可將四種溶劑按任何組合或比例混合。使用選配的內(nèi)部溶劑選擇閥，將可選溶劑擴(kuò)展到多達(dá)九種，方法更加靈活。
直接注射取樣：SM-FTN的針流入路徑采用專門的技術(shù)，在高壓力下能夠保證的進(jìn)樣針密封性，可實(shí)現(xiàn)高精度注射，具有的樣品回收率。
下一代色譜柱溫箱：我們的新式UPLC色譜柱加熱器和管理器已實(shí)現(xiàn)了標(biāo)準(zhǔn)化，具有易于操作、體積小的主動(dòng)式溶劑預(yù)加熱器，使系統(tǒng)之間具有相同的效率。色譜柱預(yù)熱器保證了穩(wěn)定的熱效能；色譜柱管理器提供了多區(qū)域的靈活性，溫度范圍為4 至 90 °C ，并可疊加使用。
受控的滯留體積：ACQUITY UPLC H-Class 的SmartStart技術(shù)（待批）可同時(shí)對(duì)梯度起始時(shí)間和各個(gè)預(yù)注射步驟進(jìn)行自動(dòng)管理。通過將這些典型的連續(xù)過程疊加起來，能夠zui大程度地縮短循環(huán)時(shí)間。

關(guān)于Waters ACQUITY UPLC TQD
沃特世TQ 檢測(cè)器是為一體化的UPLC®/MS/MS定量分析而開發(fā)的儀器，達(dá)到串聯(lián)四極桿MS的*選擇性、穩(wěn)定性、速度及準(zhǔn)確性。 為契合UltraPerformance LC® （UPLC）的超高性能，TQ檢測(cè)器以zui快的速度采集數(shù)據(jù)。與ACQUITY UPLC®系統(tǒng)一同使用，ACQUITY® TQD 系統(tǒng)為用戶所有的定量分析提供的分析檢測(cè)限分辨率及樣品通量，應(yīng)用范圍包括：生物分析、ADME篩選、食品安全、環(huán)境監(jiān)測(cè)、臨床學(xué)、法醫(yī)學(xué)等。
特色：
l 自動(dòng)化的系統(tǒng)檢查，用戶界面簡(jiǎn)單友好，使用方便，優(yōu)化的MS/MS檢測(cè)，滿足zui苛刻的定量分析需求
l 數(shù)據(jù)采集速度快，色譜峰面積測(cè)量方面的準(zhǔn)確性、重現(xiàn)性好
l 可靠耐用的ZSpray™ 大氣壓離子源，ESI、APCI、ESCi、APPI、ASAP等各種離子源模式可選
l 工業(yè)級(jí)的多模式檢測(cè)能力,一次運(yùn)行時(shí)，可同時(shí)進(jìn)行多模式的采集
l 自動(dòng)化的儀器優(yōu)化與定量方法開發(fā)工具，精巧的應(yīng)用軟件工具包，適合用戶的特定分析要求。
l 快速的數(shù)據(jù)采集能力，（采用T-Wave™ 碰撞池技術(shù)、多模式離子化技術(shù)、極性快速轉(zhuǎn)換技術(shù)）